Инсулиноподобный фактор роста (IGF)-I стимулирует миграцию и пролиферацию клеток гладкой мускулатуры сосудов (VSMC), которые являются фундаментальными для неоинтимальной гиперплазии при рестенозе после ангиопластики. Действие IGF-I модулируется несколькими высокоаффинными IGF-связывающими белками (IGFBP). IGFBP-4 является преобладающим IGFBP, продуцируемым VSMC, и является мощным ингибитором действия IGF-I. Однако специфические протеазы IGFBP-4 могут расщеплять IGFBP-4 и высвобождать активный IGF-I. В этом исследовании мы документируем протеазу IGFBP-4, продуцируемую ГМКС коронарных артерий человека и свиньи в культуре как связанный с беременностью плазменный белок-А (PAPP-A). Это было показано характерным характером расщепления IGFBP-4, специфическим ингибированием активности протеазы IGFBP-4 поликлональными антителами PAPP-A и иммунораспознаванием PAPP-A моноклональными антителами.
Моноклональные антитела
В отличие от поликлональных антител, "моноклональные антитела к белку связанному с инсулиноподобным фактором роста 4 (IGFBP-4)" представляют собой иммуноглобулины, нацеленные на один эпитоп и продуцируемые только одним клоном В-клетки. Моноклональные антитела обычно получают путем слияния клеток миеломы с клетками селезенки, выделенными от мыши или кролика, иммунизированных желаемым антигеном. Моноклональные антитела, продуцируемые у кроликов, в отличие от продуцируемых у мышей, обладают большей аффинностью и могут распознавать множественные эпитопы, в том числе и небольшого размера. Животных иммунизируют желаемым антигеном в течение 2-4 месяцев, и реакцию на антиген проверяют путем измерения титров антител в их сыворотке. Как только определяется правильный уровень иммуноглобулинов, В-клетки выделяют из селезенки и совместно культивируют с иммортализованными клеточными линиями, образуя слитые клетки, называемые гибридомами. Гибридомы можно неограниченно выращивать в специальных культуральных средах для получения больших количеств иммуноглобулина определенного типа. Эти моноклональные антитела окончательно очищают и используют в различных биологических приложениях.
Как упоминалось выше, поликлональные и моноклональные антитела имеют разные характеристики, поэтому чрезвычайно важно выбрать правильное антитело для правильного применения (например, для иммуноокрашивания, ИФА, диагностики, исследований и т. д.)
Поликлональные антитела
Поликлональные антитела представляют собой пул различных антител, нацеленных на множество эпитопов в пределах одного и того же антигена. Говорят, что этот тип антител отличается тем, что они продуцируются различными клонами В-клеток. Следовательно, они имеют разное сродство и специфичность к антигену. Эти антитела получают из иммунизированных животных, предпочтительно из кроликов. Однако они также могут образовываться у коз, коров и свиней. Для получения поликлональных антител животному проводят иммунизацию целевым антигеном в течение 3-8 месяцев с помощью многократных инъекций через этот период. Иногда к антигену также добавляют адъювант (например, полный или неполный Фрейнда) или иммуногенные пептиды (например, бычий сывороточный альбумин-BSA, овальбумин-OVA) для усиления иммунного ответа.
